显微镜之-石蜡切片的准备及需要的试剂五
所属分类:显微镜百科 点击次数:1598 发布日期:2019-08-01
在使用显微镜的时候,我们通常需要将样品切片,使样品非常薄,可以使之在显微镜的透射光源下透光率非常的好,那么石蜡切片就需要很好的技术和能力了,那么下面我们讲讲石蜡切片的准备工作及器材
3.固定液的性质和条件
(1)能迅速渗入组织,使组织细胞形态在短期内不至于有较大变化。
(2)固定液有相当的渗透力,对组织各部分的渗透力相等,可使组织内外完全固定。
(3)使组织细胞不至于因固定而引起人为的改变。
(4)尽可能避免固定剂使组织膨胀或收缩。
(5)使组织达到一定硬度,获得较佳的折光率和对染料具有较强的亲合力。
4.固定时应注意的事项
(1)固定液及被固定的组织必须新鲜;
(2)固定液的用量一般为组织体积的10~20倍,容器不要过小,材料也不要太多;应避免组织紧贴瓶底或瓶壁,以免影响固定液的渗入,必要的时候可以在瓶底垫上一层棉花;
(3)固定时间视组织块的种类、性质、大小,固定液的种类、性质、渗透力的强弱,固定时的温度的高低,实验目的等;
(4)防止被固定的组织因固定剂的作用而发生变形;
(5)固定所用的固定液,以新配的为好,放置过久会失效;
(6)在固定期间摇动组织或摇动容器有利于固定液的渗入,对长期固定的标本,可经常更换固定液
(7)取材固定应同时作好记录,包括组织名称、固定液和时间等内容。
5.固定剂
单纯固定剂
(1)10%甲醛:对组织渗透性强,固定均匀。对组织膨胀约5%,经酒精脱水时有较大的收缩。能保存脂肪,不能沉淀核蛋白及白蛋白,长期用其固定的组织使组织变为酸性,不利于染色,特别是细胞核的着色。经自来水冲洗6~24小时后,可以使其酸碱中和,并减少结晶。
(2)4%多聚甲醛:对组织穿透性好,组织收缩小,对大多数抗原物质保存较好,特别是对脂肪和各种酶的固定效果更好。固定的时间不宜太长,以24小时以内为宜,适用于免疫组织化学染色。
(3)饱和的苦味酸溶液:能沉淀一切蛋白质,渗透力弱,对组织收缩大,故一般不能单独使用。
(4)冰醋酸:渗透力强,沉淀核蛋白,对染色质固定好,使组织膨胀,故一般不单独使用。
(5)锇酸:价格昂贵,为强氧化剂,易还原成氢氧化锇,呈黑色沉淀;必须避光保存。不能沉淀蛋白质,而使蛋白质凝胶化,所以对蛋白质固定不均匀,锇酸固定的细胞能保持生活时的形态,不收缩细胞,对胞质固定较长好,核的固定不好,锇酸为脂肪及类脂质的优良固定剂,经它固定的脂肪和类脂质呈黑色,特别是对于是显示线粒体和高难度尔基复合体效果良好。
混合固定剂
(1)Bouin氏固定液:为常用的良好的固定剂,穿透速度快,组织收缩性较小,固定均匀,固定后组织有适当的硬度,对于切片和染色均有良好的效果。一般固定12~24小时,固定后入70%酒精洗去苦味酸的黄色,在脱水时经各浓度酒精也可洗去黄色,在酒精中加入氨水一滴或少许碳酸钾饱和水溶液,可加快洗去苦味酸的黄色即使留有少量苦味酸的黄色,对一般染色体并无影响。
(2)Zenker液(PH2.3):此液多用于一般组织的固定,它能使细胞核、细胞质染色清晰但固定时间长,一般要12~36小时,加热可以缩短固定时间。固定后的组织必须流水冲洗12小时,由于固定中含有升汞,在经70%酒精脱水时,加少量的碘液(0.5%碘酒精)以脱汞。
(3)Carnoy液:渗透力强,特别适宜于固定染色体、肝糖、粘液等一些较为细微的结构。显示DNA、RNA效果良好。
(4)改良Bouin氏固定液:此液对一般组织固定效果都很好,固定时间为4~18小时,固定后直接放70%乙醇脱水,固定时间较长对组织亦无损害。
(七) 组织块修整
固定后的组织块可能会在外部形态上有些改变,或者由于组织在还未固定时就取材,组织器官较软,取材不容易切平。经固定后的组织有一定的硬度,此时就可以做一些修整,但改变不要太大,只是将组织材料切取平整,修掉一些不规则的部位。修整组织块时,手术切片一定要锋利。
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